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www.99073.com80冻存的组织反复冻融会影响提rna吗

ʱ䣺 2019-10-27

  注释:该步骤并非必要,多数Protocol省略该步骤,但加入该步中能明显提高RNA的质量;注意不能离心时间过长,否则沉淀难以吸出,将200ul黄枪头尖部切去0.5cm操作;

  注释:一般情况下提取的RNA已经足够,而且在逆转录过程中RNA的质量要远较RNA的数量更重要,一般仅取上清的上1/2左右足矣,这样可最大限度避免对于中间蛋白相的扰动;

  7). 加入等体积异丙醇(约800ul),充分混匀,冰上静置15min;

  8). 4℃ 16000′g离心15min,轻轻倒掉上清,仅留管底沉淀;

  9). 加入1ml预冷的无水乙醇,4℃ 16000′g离心2min,轻轻倒掉上清,仅留管底沉淀;

  13). 4℃ 16000′g离心15min,轻轻倒掉上清,www.99073.com,仅留管底沉淀;

  注释:该步骤的目的在于去除小分子降解RNA和盐分;但可以省略;只有大分子RNA在高浓度LiCl中沉淀,DNA不会沉淀;

  14). 加入1ml预冷的无水乙醇,4℃ 16000′g离心2min,轻轻倒掉上清,仅留管底沉淀;

  注释:该步的目的在于去除LiCl,LiCl溶于乙醇,而RNA不溶于乙醇,利用溶解度分离;

  15). 倒置Eppendorf管于干净滤纸上,至可见乙醇完全挥发RNA边缘呈半透明;

  17). 取出5ul 用于紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳,其余冻存-70℃。


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